https://www.thermofisher.com/ru/ru/home/products-and-services/promotions/russia-promos.html?cid=PJT6312-WPR2373-russiapromos-FURL-0620-EU
Подписаться
Продукция 2021 года: белки и антитела к SARS-CoV-2
Объявление

Продукция 2021 года: белки и антитела к SARS-CoV-2

Коронавирусная инфекция уже привела к заражению около 180 миллионов людей и летальному исходу около 3,9 млн человек, согласно Our World in Data и JHU CSSE COVID-19 Data. SARS-CoV-2 характеризуется длительным инкубационным периодом, высокой контагиозностью и патогенностью, а также отсутствием стандартов лечения. Вакцинация — многообещающее решение формирования быстрого коллективного иммунитета для прекращения пандемии COVID-19.

Компания Genetex разработала белки и антитела к SARS-CoV-2 для создания белковых вакцин и наборов для молекулярной диагностики. Продукция доступна у официального дистрибьютора в России — компании Микротесты б.м.в.

Также компания Genetex проводит вебинар «Открытие новых противовирусных веществ в борьбе с патогенными вирусами человека: история двух новых вирусов — SARS-CoV-2 и вируса Зика» (на английском) 25 августа 2021 г. (ср) 18:30–20:00 (по московскому времени). Необходима регистрация.

В рекордное время был секвенирован геном вируса и определена его структура, что позволило в кратчайшие сроки начать разработку вакцин. На данный момент известно более 150 вакцин, которые классифицируются на 8 биотехнологических платформ. Подавляющее большинство из них — это белковые вакцины [1–3].

Биотехнологические платформы вакцин

Рисунок 1. Биотехнологические платформы вакцин

Белковые вакцины состоят из белковых субъединиц или вирусоподобных частиц.

  1. В настоящее время в разработке находятся 28 вакцин, содержащих вирусные белковые субъединицы: шиповидный белок или рецептор-связывающий домен (RBD) шиповидного белка. Данным вакцинам требуются адъюванты (молекулы, усиливающие иммунный ответ), а также неоднократное введение доз вакцин [2].
  2. Белковая субъединица

    Рисунок 2. Белковая субъединица

  3. Вакцины на основе вирусоподобных частиц представляют собой оболочку вируса с белками, лишенную генетической информации. Такую биотехнологическую платформу используют для 5 разрабатываемых вакцин: они безопасны и дают сильный клеточный иммунный ответ, но сложны в производстве [2].
  4. VLP

    Рисунок 3. Вирусоподобные частицы (VLP, Virus-like particle)

Ситуация осложняется тем, что с конца 2020 года произошла эволюция SARS-CoV-2 благодаря мутациям, которые повлияли на его трансмиссивность и антигенность (появление британского, южноафриканского, бразильского и индийского штаммов). Это так называемый дрейф антигенов, естественный случайный процесс образования и накопления ошибок в ходе репликации вируса. Если дрейф антигенов происходит в регионе RBD, то он способен приводить к снижению нейтрализующей активности антител, образующихся после вакцинации или болезни.

Для того чтобы преодолеть пандемию в короткий период, критически важно иметь возможность адаптировать вакцины и наборы для молекулярной диагностики к новым вариантам SARS-CoV-2 [4–6].

Компания Genetex рада предложить вам антитела и рекомбинатные белки дикого типа шиповидного белка, с одиночными мутациями, а также белки 4 мутантных штаммов коронавируса (таблицы 1–5, рис. 4–5).

Таблица 1. Рекомбинантные белки дикого типа и с одиночными мутациями шиповидного белка
Название продукта Система экспрессии Каталожный номер
Spike (ECD) protein, His tag (active) HEK293 GTX135972-pro
Spike RBD protein, His tag (active) HEK293 GTX136090-pro
Spike S1 protein, His tag (active) HEK293 GTX135817-pro
Spike S2 (ECD) protein, mouse IgG Fc tag HEK293 GTX135684-pro
Spike (D614G Mutant) protein (ECD), His tag (active) HEK293 GTX02575-pro
Таблица 2. Рекомбинантные шиповидные белки варианта B.1.1.7 (британский штамм)
Название продукта Система экспрессии Каталожный номер
Spike (del69-70, del144, N501Y, A570D, D614G, P681H,T716I, S982A, D1118H) (ECD) Protein, His tag (active) HEK293 GTX136059-pro
Spike RBD (N501Y Mutant) protein, His tag (active) HEK293 GTX136014-pro
Spike RBD (E484K, N501Y Mutant) protein, His tag (active) HEK293 GTX136058-pro
Spike S1 (del69-70, del144, N501Y, A570D, D614G, P681H Mutant) protein, His tag HEK293 GTX136085-pro
Spike S2 (T716I, S982A, D1118H Mutant) (ECD) protein, His tag HEK293 GTX136023-pro
Таблица 3. Рекомбинантные шиповидные белки варианта B.1.351 (южноафриканский штамм)
Название продукта Система экспрессии Каталожный номер
Spike (L18F,..., K417N, E484K, N501Y,...)(ECD) Protein, His tag (active) HEK293 GTX136061-pro
Spike RBD (K417N, E484K, N501Y Mutant) protein, His tag (active) HEK293 GTX136022-pro
Spike S1 (L18F, D80A, D215G, R246I, K417N, E484K, N501Y, D614G Mutant) protein, His tag HEK293 GTX136095-pro
Таблица 4. Рекомбинантные шиповидные белки варианта P.1 (бразильский штамм)
Название продукта Система экспрессии Каталожный номер
Spike (L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, E484K, N501Y, D614G, H655Y, T1027I, V1176F Mutant) (ECD) protein, His tag HEK293 GTX136091-pro
Spike RBD (K417T, E484K, N501Y Mutant) protein, His tag (active) HEK293 GTX136043-pro
Spike S1 (L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, E484K, N501Y, D614G Mutant) protein, His tag HEK293 GTX136094-pro
Таблица 5. Рекомбинантные шиповидные белки вариантов B.1.617.1 (Kappa) и B.1.617.2 (Delta) — индийские штаммы)
Название продукта Система экспрессии Каталожный номер
SARS-CoV-2 (COVID-19) Spike RBD (L452R, E484Q Mutant) protein, His tag (active) HEK293 GTX136299-pro
SARS-CoV-2 (COVID-19) Spike RBD (L452R, T478K Mutant) protein, His tag HEK293 GTX136332-pro
Таблица 6. Нейтрализующие антитела HL1002 (GTX635791) к RBD шиповидного белка SARS-CoV-2 дикого типа и новых штаммов коронавируса
Название продукта Каталожный номер Характеристика Применение
SARS-CoV-2 (COVID-19) Spike RBD antibody [HL1002] GTX635791 Кроличьи моноклональные антитела.
Иммуноген: полноразмерный рекомбинантный белок RBD SARS-CoV-2
ИФА, сэндвич ИФА, функциональный тест, анализ на нейтрализацию/ингибирование
Анализы ингибирования

Рисунок 4. Анализы ингибирования взаимодействия RBD дикого типа и новых штаммов коронавируса с рецептором ACE2 с помощью нейтрализующих антител (конкурентный непрямой ИФА). Иммобилизованные RBD шиповидного белка SARS-CoV-2 с активной гистидиновой меткой (дикий тип) и RBD шиповидного белка SARS-CoV-2 с активной гистидиновой меткой новых вариантов коронавируса (адсорбировали в концентрации 2 мкг/мл), связывающихся с растворимым белком ACE2 (ECD) человека, содержащим активную метку Fc-фрагмента мышиного IgG (GTX135683-pro) (1000 нг/мл). Связывание ингибировалось при повышении концентрации нейтрализующего антитела [HL1002] к RBD (13,72-10000 нг/мл). Для выявления белковых комплексов добавляли козьи антимышиные антитела IgG, меченные пероксидазой хрена (HRP) (GTX213111-01) (1:10000).

Схема анализа ингибирования

Рисунок 5. Схема анализа ингибирования взаимодействия RBD и ACE2 с помощью нейтрализующих антител HL1002 (GTX635791).

Производимые компанией Genetex антитела обладают разной аффинностью к новым штаммам коронавируса (анализ проведен с помощью непрямого ИФА; табл. 6).

Таблица 7. Перечень антител, производимых компанией Genetex
Эпитопная специфичность антитела Каталожный номер антитела Клон WIV04/2019 (дикий тип) B.1.1.7 B.1.351 P.1
RBD GTX635807 HL1014
RBD GTX635792 HL1013
RBD GTX635793 HL1004
S1 GTX635713 HL13402
S1 GTX635708 GT263
S2 GTX632604 1A9
S2 GTX635693 HL237
• — сильная реакция. Определяется как значение оптической плотности (450нм) >1 при использовании 1 мкг/мл белка.
○ — слабая реакция. Определяется как значение оптической плотности (450нм) >1 при использовании 4 мкг/мл белка.
✖ — никакой реакции. Определяется как значение оптической плотности (450нм) <1 при использовании 4 мкг/мл белка.

Литература

  1. Shin M.D., Shukla S., Chung Y.H. et al. (2020). COVID-19 vaccine development and a potential nanomaterial path forward. Nature Nanotechnology. 15, 646–655
  2. Callaway E. (2020). The race for coronavirus vaccines: a graphical guide. Nature. 580, 576–577
  3. «Биомолекула»: «Гонки вакцин 2020»
  4. Harvey W.T., Carabelli A.M., Jackson B. et al. (2021). SARS-CoV-2 variants, spike mutations and immune escape. Nat Rev Microbiol.. 19, 409–424
  5. Volkan E. (2021). Structural Considerations for Virus Pathogenesis, Therapeutic Strategies and Vaccine Design in the Novel SARS-CoV-2 Variants Era. Mol Biotechnol. 18, 1–13
  6. Starr T.N., Greaney A.J., Hilton S.K., Ellis D., Crawford K.H.D., Dingens A.S., Navarro M.J., Bowen J.E., Tortorici M.A., Walls A.C., King N.P., Veesler D., Bloom J.D. (2020). Deep Mutational Scanning of SARS-CoV-2 Receptor Binding Domain Reveals Constraints on Folding and ACE2 Binding. Cell. 182 (5), 1295–1310

Комментарии