Аутоиммунные заболевания

Рассеянный склероз в Латинской Америке

С каждым годом все больше людей получают диагноз «рассеянный склероз». Согласно данным MS International Federation, глобальная распространенность заболевания продолжает расти. При этом становятся известны и региональные вариации, например, в одних странах и регионах заболевание встречается чаще, а в других — реже. Такая разница может дать ценные сведения для понимания патофизиологии заболевания, а также для разработки мер профилактики и лечения.

В обзоре говорится о том, что распространенность рассеянного склероза в Латинской Америке сравнительно низкая. Это может быть связано как с историческими особенностями популяционной структуры региона, так и с воздействием природных и климатических факторов Южного полушария. Все перечисленные причины в обзоре подробно обсуждаются. Авторы приводят сводную таблицу исследований, в которых представлена распространенность рассеянного склероза в странах Латинской Америки и на Карибах. А также они предоставляют список имеющихся ресурсов для поддержки и лечения пациентов с этим заболеванием. — Epidemiology and characteristics of multiple sclerosis in Latin America.

Онкология

Клеточная гибель и лечение опухолевых заболеваний

Устойчивость к клеточной гибели является одной из ключевых характеристик злокачественных опухолей. Именно она во многом способствует прогрессированию опухоли и снижает эффективность противоопухолевой терапии. В обзоре подробно обсуждают ферроптоз, купроптоз и дисульфидптоз, а также их «взаимодействие» друг с другом и то, насколько имеющаяся о них информация, связанная с онкологией, может стать основой для разработки новых терапевтических стратегий, направленных на избирательную индукцию гибели опухолевых клеток. Обзор насыщен информацией и точно будет полезен заинтересованным в клеточной гибели (в общем и в частном), в лечении различных онкологических заболеваний, в молекулярных причинах возникновения устойчивости к лекарственным средствам. — Exploiting metabolic cell death for cancer therapy.

Эпигенетическая регуляция снижения числа T-клеток при онкологических заболеваниях

Современные стратегии иммунотерапии, основанные на использовании T-клеток, включая блокаду иммунных контрольных точек (ICB) и CAR-T-клеточную терапию, сделали большой прогресс в лечении онкологических заболеваний. Однако значительная часть пациентов либо не отвечает на терапию, либо не достигает длительной защиты от рецидива. В обзоре обсуждают транскрипционную и эпигенетическую регуляцию снижения числа T-клеток при онкологических заболеваниях. Также авторы говорят о перспективах усовершенствования иммунотерапии. — Epigenetic regulation of T cell exhaustion in cancer.

Деконволюция транскриптомов онкологических образцов

Опухолевые ткани обычно гетерогенны, то есть состоят из опухолевых, стромальных, иммунных клеток. И гетерогенность оказывает существенное влияние на прогрессирование заболевания и ответ на терапию. Имеющиеся данные массового (bulk-seq) анализа экспрессии генов, полученные из клинических образцов опухолевой ткани, отражают усредненный сигнал от различных типов клеток, присутствующих в образце. Поэтому увидеть вклад каждого типа клеток — задача нетривиальная. Тем не менее, она решаема методами деконволюции.

В обзоре представлено подробное руководство, которое поможет сориентироваться в разнообразии целых 43 (!) доступных алгоритмов деконволюции транскриптомных данных. Авторы обсуждают критерии выбора метода в зависимости от типа данных, исследовательских задач и ограничений анализа, а также предлагают рекомендации (что очень ценно!) по тому, как максимально эффективно использовать массовые (bulk-seq) транскриптомные данные для получения биологически и клинически значимых выводов. — A guide to transcriptomic deconvolution in cancer.

Нейтрофильные внеклеточные ловушки

Нейтрофильные внеклеточные ловушки (NETs) влияют на инициацию опухолевого процесса, его прогрессирование и метастазирование за счет иммуносупрессивных механизмов в опухолевом микроокружении. В опухолевом иммунном микроокружении (TIME, Tumor Immune Microenvironment) нейтрофилы могут проходить процесс нетоза (NETosis). Это можно представить так, что они буквально высвобождают «сети» ДНК, покрытые белками (похожие на ловушки), которые способствуют росту опухоли, её инвазии и уклонению от иммунитета.

В обзоре представлены современные данные о биологии нейтрофильных внеклеточных ловушек. Авторы указывают на необходимость проведения дальнейших клинических испытаний, направленных на оценку их роли и эффективности терапевтических стратегий, ориентированных на подавление нетоза и связанных с ним процессов. — Neutrophil extracellular traps in cancer, «Биомолекула»: «NETs: почему ДНК помогает болезни и как очистить кровь от опасного мусора».

Лечение метастазирующих онкологических заболеваний с помощью наномедицины

Лечение метастазов остается для врачей непростой терапевтической задачей из-за выраженной гетерогенности метастатических опухолевых клеток и многоэтапного, динамичного характера метастатического каскада. А именно, последовательности шагов: инвазия опухолевых клеток, интравазация — проникновение опухолевых клеток в кровеносные или лимфатические сосуды, циркуляция в кровотоке, экстравазация — выход опухолевых клеток из кровеносного или лимфатического сосуда в окружающие ткани, и колонизация отдаленных органов. На сегодняшний день восемь антиметастатических нанопрепаратов уже одобрены для клинического применения, более 20 находятся на стадии клинических исследований, а многочисленные платформы активно изучаются в доклинических моделях.

В обзоре рассматриваются принципы разработки наномедицинских платформ, предназначенных для специфического воздействия на различные стадии метастазирования, а также обсуждаются подходы к повышению их избирательности и терапевтической эффективности, и основные in vitro и in vivo модели, используемые для изучения метастатического процесса. — Targeting metastasis with nanomedicine.

Синтетическая летальность и поиск лекарств для лечения онкологических заболеваний

Синтетическая летальность — это явление, при котором одновременное нарушение «работы» двух генов приводит к гибели клетки, тогда как мутация или инактивация любого из этих генов по отдельности не оказывает такого глобального эффекта.

В контексте онкологии этот принцип используется для избирательного уничтожения опухолевых клеток. Если опухолевая клетка несет мутацию в одном определенном гене, исследователи ищут другой ген, ингибирование которого приведет к гибели именно этой мутантной клетки, не затрагивая здоровые клетки с нормальным генотипом. Таким образом, синтетическая летальность позволяет разрабатывать таргетные терапии, направленные на специфические генетические зависимости опухолевых клеток, повышая эффективность лечения и снижая побочные эффекты. В обзоре рассматриваются современные достижения в открытии и валидации синтетически летальных пар: от масштабных генетических скринингов до разработки клинически применимых лекарственных средств. Особое внимание уделяется альтернативным подходам на основе CRISPR, включая комбинаторные скрининги, базовое редактирование и насыщающий мутагенез, которые позволяют выявлять новые доступные для терапии взаимодействия. — Synthetic lethality in cancer drug discovery: challenges and opportunities, «Биомолекула»: «Отступают, но не сдаются: что помогает опухолевым клеткам противостоять лекарственной терапии».

Влияние сопутствующих препаратов на эффективность терапии ингибиторами иммунных контрольных точек у пациентов с онкологическими заболеваниями

Во время противоопухолевой терапии пациенты часто принимают лекарства для лечения сопутствующих заболеваний и смягчения побочных эффектов, связанных с онкологическим процессом. Несмотря на то, что многие широко применяемые препараты обладают иммуномодулирующими свойствами, их взаимодействие с ингибиторами иммунных контрольных точек (ICIs) остается недостаточно изученным.

В обзоре рассматриваются новые данные о влиянии сопутствующего приема лекарств на терапевтический ответ, индуцируемый ICIs, а также на развитие иммунноопосредованных побочных эффектов. Авторы обсуждают потенциал иммуномодулирующих препаратов, назначаемых для других сопутствующих состояний, с целью повышения эффективности терапии ингибиторами контрольных точек и улучшения клинических исходов у пациентов с онкологическими заболеваниями. — The impact of concomitant medications on treatment outcomes in patients with cancer receiving immune checkpoint inhibitors, «Биомолекула»: «Иммунитет без тормозов: Нобелевская премия за антитела против рака (2018)».

Генетика

Фазирование гаплотипов и импутация генотипов

Фазирование гаплотипов (определение того, какие генетические варианты расположены на одной хромосоме) и импутация генотипов (восстановление неполной последовательности генотипов до полной с использованием различных статистических моделей) повышают точность геномных исследований. В том числе они активно используются для подготовки данных для различных GWAS исследований (полногеномных исследований ассоциаций).

В обзоре авторы описывают эволюцию инструментов для фазирования гаплотипов и импутации генотипов. Можно заметить, как они адаптировались к стремительному росту объемов геномных данных и появлению новых технологий секвенирования. Авторы обсуждают методологические улучшения, направленные на повышение точности, масштабируемости и вычислительной эффективности этих подходов в условиях анализа все более крупных и сложных наборов данных. Также обсуждается использование длинных прочтений (long-read sequencing). — Advances in haplotype phasing and genotype imputation.

Анализ эффектов мутаций

Благодаря широкому использованию клинического генетического тестирования значительно повысилась выявляемость все новых, связанных с различными признаками, в том числе заболеваниями, генетических вариантов. Однако для большинства из них по-прежнему недостаточно данных, чтобы надежно классифицировать их как патогенные или непатогенные. В результате накапливается большое число вариантов с неопределенным клиническим значением.

В обзоре рассматриваются современные достижения в развитии технологий мультиплексных анализов функциональных эффектов вариантов (multiplexed assays of variant effect, MAVEs), прямо от первых разработок до их активного внедрения в клинику. А также даются рекомендации по использованию полученных данных в клинической практике. MAVEs — это масштабируемые экспериментальные платформы, позволяющие одновременно получать функциональные данные для тысяч генетических вариантов.

Авторы подчеркивают, что такие подходы способствуют более точной интерпретации патогенности генетических вариантов, созданию персонализированных лекарственных средств и выбору таргетной терапии на основе индивидуальных молекулярных характеристик пациента. — Multiplexed assays of variant effect for clinical variant interpretation, «Биомолекула»: «Настоящее и будущее генетических тестов».

Экспериментальная эволюция

В обзоре рассматривается, как современные достижения в области редактирования геномов трансформируют подходы к экспериментальной эволюции.

Авторы подчеркивают, что новые технологии позволяют более точно контролировать генетические изменения и наблюдать за их влиянием на фенотип, и это открывает уникальные возможности для изучения генетических механизмов и эволюционных сил, формирующих фенотипическое разнообразие. Имеющиеся подходы помогают не только реконструировать пути эволюционных адаптаций, но и предсказывать возможные траектории изменения организмов под действием естественного отбора. Тем не менее, важно помнить и про отличия между естественной эволюцией и экспериментальной, и об этом тоже сказано в обзоре. — Experimental evolution in an era of molecular manipulation.

Биология развития

Пространственная архитектура развития организма и их заболеваний

Архитектура ткани формируется в результате сложного, многоуровневого (по своей сложности) молекулярного взаимодействия. И даже незначительные нарушения пространственного контекста могут запускать патологические процессы. Современные пространственные омиксные технологии значительно расширили возможности изучения этой темы, позволив с высокой детализацией анализировать организацию тканей, их здоровое состояние и болезнь. Именно этой теме и посвящен довольно сложный (по теме, по манере написания и объяснения информации) обзор.

Авторы рассматривают молекулярные изменения при широком спектре патологических состояний, включая нарушения развития, опухолевый процесс, фиброз и реакции на повреждение, нейродегенерацию, инфекционные и воспалительные заболевания. — Spatial architecture of development and disease.

Биомы Земли

Микроорганизмы играют фундаментальную роль в поддержании жизни на Земле, участвуя в ключевых биологических процессах и вступая в разнообразные взаимодействия с другими организмами. Они формируют экосистемы, обеспечивают биогеохимические циклы и оказывают влияние как на здоровье человека, так и на состояние окружающей среды.

Благодаря развитию технологий секвенирования и анализа генетических данных, удалось узнать и начать изучать, где-то с большим успехом, где-то — с меньшим, про огромное разнообразие микроорганизмов и вирусов в различных экосистемах нашей планеты.

В обзоре рассматриваются достижения в области метагеномики, секвенирования одиночных клеток и функционального профилирования, которые способствуют более глубокому пониманию эволюции, биогеографии и экологической динамики микробиомов Земли. — A genomic view of Earth’s biomes.

Медицина

Древняя ДНК: как прошлые эпидемии рассказывают о будущем инфекций

Обзор посвящен возможностям древней ДНК в изучении эволюции патогенов и их взаимодействия с человеком. Авторы показывают, как анализ геномов древних микроорганизмов и их хозяев помогает реконструировать события зоонозных переходов, пандемий и адаптаций, а также выявить генетические, культурные и экологические факторы, определяющие устойчивость или уязвимость популяций. Отдельное внимание уделяется технологическим прорывам — росту числа секвенированных образцов и новым методам анализа, которые позволяют рассматривать систему «хозяин—патоген» в более широком экосистемном контексте. Обзор обозначает перспективы дальнейших исследований, включая усиление междисциплинарного сотрудничества для более глубокого понимания исторической динамики инфекций. — Ancient DNA insights into diverse pathogens and their hosts, «Биомолекула»: «Древняя ДНК: привет из прошлого».

Системы модификации РНК как терапевтические мишени

Обзор посвящен эпитранскриптомике — системам ферментов, которые «записывают», «считывают» и «стирают» химические модификации РНК и тем самым регулируют стабильность и трансляцию транскриптов. Особое внимание уделено пути N6-метиладенозина (m6A): ингибиторы ключевой метилтрансферазы METTL3 уже проходят клинические испытания как противоопухолевые препараты, а белки-ридеры семейства YTH рассматриваются как новые лекарственные мишени. Авторы обсуждают как успехи и ограничения ранних разработок, так и потенциал воздействия на другие типы РНК-модификаций. В целом, работа показывает, что таргетирование систем модификации РНК может стать новой стратегией для лечения рака, усиления иммунотерапии и повышения эффективности клеточных технологий. — RNA modification systems as therapeutic targets, «Биомолекула»: «Точный удар: как редактирование мРНК победит неизлечимые болезни”».

Прозрачность медицинских систем искусственного интеллекта

В обзоре рассматривается ключевая проблема медицинского ИИ — прозрачность систем, которые все чаще участвуют в диагностике и выборе лечения, но нередко остаются «черными ящиками». Авторы подчеркивают, что доверие пациентов, врачей, разработчиков и регуляторов возможно лишь при прозрачности на всех этапах — от сбора и аннотирования данных до проектирования, валидации и клинического внедрения моделей. В работе анализируются современные методы объяснимого ИИ, а также необходимость постоянного мониторинга производительности и обновления систем в реальных условиях. Отдельное внимание уделено нормативным рамкам и барьерам интеграции инструментов прозрачности в клинические процессы, а также задаче демократизации доступа к крупным моделям, без чего безопасное и эффективное внедрение медицинского ИИ невозможно. — Transparency of medical artificial intelligence systems, «Биомолекула»: «История развития искусственного интеллекта и его пришествия в биологию».

Микробиом кожи человека: от метагеномов к терапии

В этом обзоре обсуждается современное понимание микробиома кожи — разнообразного сообщества бактерий, грибов, вирусов и клещей, которые поддерживают здоровье кожи, защищают от патогенов и регулируют иммунный ответ. Авторы описывают, как внедрение метагеномного секвенирования позволило детально изучить состав и функции микробиома, выявить штаммы и генные пути, а также открыть новые терапевтические мишени. Обзор освещает возможности разработки средств на основе микробиома для лечения кожных заболеваний, приводя примеры исследований, демонстрирующих перспективные подходы, а также обсуждает текущие проблемы и ограничения в применении микробиомной терапии. — The human skin microbiome: from metagenomes to therapeutics, «Биомолекула»: «Население кожи: как микробиом влияет на ее общее состояние и при чем тут генетика?».

Биоразнообразие

Биологическое разнообразие, геномика, экология и эволюция грибов, образующих плодовые тела

Обзор посвящен классу Agaricomycetes — одной из самых разнообразных и эволюционно древних групп базидиомицетов, чья история насчитывает более 350 миллионов лет. Эти грибы, формирующие плодовые тела, играют ключевую роль в экосистемах как главные редуценты древесной биомассы и симбиотические партнеры растений, а также представляют интерес для медицины и «зеленых» технологий. Авторы показывают, как геномные и филогеномные подходы позволили реконструировать эволюцию морфологических признаков и образа жизни предков, углубить понимание механизмов развития плодовых тел и экологических стратегий. Вместе с тем, подчеркивается, что дальнейший прогресс требует перехода к постгеномной эпохе — интеграции функциональной геномики, экспериментальных систем и обратной генетики для решения сложных вопросов биологии и сохранения этого уникального разнообразия грибов. — The biodiversity, genomics, ecology and evolution of mushroom-forming fungi, «Биомолекула»: «Недооцененный потенциал грибов».

Биоинженерия

Обнаружение и характеристика микропластика и нанопластика в биологических образцах

Помните известную шутку стендап-комика Джорджа Карлина про новую парадигму «Земля + пластик»? Так вот, спустя четверть века смеяться уже не хочется. Частицы от 1 микрометра до 5 миллиметров, и даже наноразмера — то, что собирательно именуют «микропластик» — находят не только в воде, воздухе и почве, но уже и в организме человека. Однако большинство методов их обнаружения разработаны для чистых сред (например, воды) и плохо подходят для биологических образцов. В новом обзоре ученые проанализировали современные подходы к выявлению этих частиц в живых организмах. Авторы подчеркивают, что, хотя сегодня пластик находят даже в головном мозге, пути его попадания в организм и долгосрочные риски для здоровья остаются малоизученными. Кроме того, токсикологические эксперименты часто проводят с «идеальными» лабораторными частицами, которые не похожи на реальный пластиковый мусор из окружающей среды — состаренный и покрытый биопленками. По мнению авторов, выходом может стать комбинация различных методик, таких как масс-спектрометрия, микроскопия и машинное обучение. Также помочь делу может маркировка микрочастиц в экспериментах с помощью изотопных меток. Стандартизация таких подходов позволит, наконец, понять, насколько серьезную угрозу микропластик представляет для здоровья людей и экосистем. — Detection and characterization of microplastics and nanoplastics in biological samples, «Биомолекула»: «Пластисфера: невидимый мир», «Ванильные мечты о пластике».

Неврология

Неинвазивная стимуляция головного мозга: ее настоящее и будущее в неврологии

Методы неинвазивной стимуляции мозга — например, транскраниальная магнитная стимуляция и воздействие слабым током — все чаще применяются для улучшения памяти, речи и движений при болезни Альцгеймера, Паркинсона, инсульте и черепно-мозговых травмах. Однако, как отмечают авторы обзора, хотя эти методики и многообещающие, их эффективность остается нестабильной. Главная проблема в том, что большинство протоколов используют «усредненный» подход, так как выбираются одинаковые зоны воздействия для всех пациентов. Но мозг каждого человека по-своему уникален, а одни и те же заболевания поражают порой разные нейросети. К примеру, при инсульте стандартная стимуляция моторной коры часто не дает результата, потому что восстановление зависит от работы более глубоких структур — таких как полосатое тело. Авторы предлагают переходить к персонализированным методам: подбирать мишени для стимуляции на основе данных МРТ и ЭЭГ, воздействовать на несколько зон одновременно и использовать ускоренные протоколы. Особые надежды возлагаются на новые технологии — например, на транскраниальную стимуляцию интерференционными токами, которая позволяет неинвазивно «достать» до глубоких отделов мозга. Это открывает путь к более точной и эффективной реабилитации без хирургического вмешательства. — Non-invasive brain stimulation: current and future applications in neurology, «Биомолекула»: «Инструкция к перезагрузке мозга: неинвазивная нейромодуляция для лечения резистентной депрессии».

Усталость: распространенный, но плохо изученный симптом неврологических и не неврологических заболеваний

Те, кому не посчастливилось переболеть COVID-19, хорошо помнят изнуряющее чувство усталости, выходящее далеко за пределы привычной нормы. Усталость — один из самых частых симптомов при неврологических и других хронических заболеваниях, но до сих пор нет четкого понимания, что это такое? Задачу классифицировать и структурировать наши представления об усталости взяли на себя авторы обзорной статьи. Они выделяют три типа усталости по происхождению: нейрогенную (связанную с работой нервной системы), миогенную (обусловленную изменениями в мышцах) и системную (вызванную общими процессами в организме, например, воспалением). Также предлагают различать по проявлениям во времени (временная или хроническая), в каких сферах наблюдается (физическая или умственная) и связана ли усталость напрямую с болезнью или с побочными факторами вроде лекарств или нарушений сна. Авторы подчеркивают, что механизмы усталости сложны и включают генетику, воспаление, изменения в структурах мозга и поведенческие реакции. Поэтому и подход к лечению должен быть комплексным: от когнитивно-поведенческой терапии до физических упражнений и немедикаментозной стимуляции мозга. В конечном счете, понимание природы усталости и ее типов поможет врачам точнее подбирать терапию и улучшить качество жизни пациентов. — Fatigue: a common but poorly understood symptom in neurological and non-neurological diseases.

Молекулярная клеточная биология

Гомеостаз лизосомальных мембран и его значение в физиологии и заболеваниях

Лизосомы — это крошечные структуры внутри наших клеток, которые можно назвать «мусороперерабатывающими заводами». Ненужные белки, жиры и даже целые бактерии — все «сгорает» в лизосомальной топке. Но лизосомы в более широком смысле — это платформы для управления клеточным метаболизмом. Однако их мембрана уязвима: ее могут повредить токсичные белки, кристаллы, некоторые лекарства и даже наночастицы. Когда лизосома повреждается, клетка запускает систему экстренного ремонта. В дело вступают несколько механизмов: ESCRT (endosomal sorting complex required for transport) — комплексы «заклеивают» разрывы, эндоплазматическая сеть доставляет «заплатки» из липидов, а специальные белки вроде аннексинов закрывают крупные пробоины. Если повреждение слишком серьезное, клетка изолирует и переваривает неисправную лизосому с помощью процесса лизофагии. Одновременно активируется производство новых лизосом, чтобы восполнить потери. Сбои в работе этой системы ведут к болезням: накоплению токсичных отложений при нейродегенерации, воспалению или инфекциям. О том, как понимание механизмов повреждения лизосом может помочь разработке новых методов лечения рака и более эффективных вакцины на основе наночастиц, рассказывает обзор. — Lysosomal membrane homeostasis and its importance in physiology and disease, «Биомолекула»: «Обличая порок стяжательства»: можно ли победить болезни накопления генной терапией?».

Нейробиология

Программируемая дегенерация аксонов: механизм, ингибирование и терапевтический потенциал

Если аксон перерезан, его часть, отделенная от тела клетки, обречена: запускается программа самоуничтожения. Впрочем, происходит это не сразу. Процесс дегенерации аксона описал Август Уоллер (Валлер) еще в середине XIX века. Сейчас известно, что дегенерация развивается вместе со снижением уровня NAD+, что и сужает окно возможностей для сращивания поврежденного аксона и тела нейрона. Но, как выяснили ученые, механизм дегенерации включается не только при травмах, но и при многих заболеваниях нервной системы — от нейропатий до бокового амиотрофического склероза. Виноват во всем белок SARM1. В здоровом аксоне он заблокирован, но при повреждении SARM1 активируется и начинает истощать запасы NAD+, что ведет к гибели аксона. Этот путь назвали программируемой дегенерацией аксона. Удивительно, но этот процесс можно заблокировать. Если вмешаться вовремя, можно сохранить аксоны даже после травмы или при токсическом воздействии химиотерапии. Это открывает путь к лечению состояний, которые раньше считались необратимыми. О решенных и еще ждущих решения вопросах спасения и восстановления аксонов рассказано в обзоре. — Programmed axon degeneration: mechanism, inhibition and therapeutic potential.

Эволюционное происхождение синаптических белков и изменение их роли в различных организмах на протяжении эволюции

Синапс — это не просто контакт между двумя нервными клетками, это сложнейшая молекулярная машина, обеспечивающая передачу сигналов. Но вот такой парадокс — есть животные без нервных клеток, но с генами синаптических белков. А все дело в том, что синапсы не появились из ниоткуда. Их ключевые белки гораздо древнее самих нейронов: многие из них уже существовали у одноклеточных предков животных, в частности, у воротничковых жгутиконосцев (хоанофлагеллят). Эти древние белки использовались для совершенно иных целей — например, для питания. Авторы обзора сравнивают четыре группы примитивных животных: гребневиков, губок, пластинчатых и кишечнополостных — и предлагают модель постепенной сборки синапса, от систем секреции до электрической возбудимости и формирования стабильных межклеточных контактов с четким различением «передатчика» и «приемника». Полноценный синапс, по мнению авторов, — результат эволюционной сборки модулей, которая шла параллельно с усложнением образа жизни животных. — The evolutionary origins of synaptic proteins and their changing roles in different organisms across evolution.